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线粒体核酸内切酶Endonuclease G(ENDOG)是由核基因编码,主要定位于线粒体膜间隙,少量存在于细胞质和细胞核的蛋白质。前期的研究发现,ENDOG在细胞凋亡过程中,从线粒体释放,进入细胞核进行染色质DNA的切割,促进细胞凋亡[1, 2]。此外,ENDOG还在细胞增殖[3]、DNA重组[4]、线粒体DNA合成[5]以及细胞应对氧化应激过程中起到重要作用[6]。研究发现,ENDOG也参与了...
建立HBV esiRNA文库并研究该文库对HepG2.215细胞内HBV表面抗原(HBsAg)表达的抑制效应。方法 制备并纯化大肠杆菌核糖核酸内切酶Ⅲ GST 融合蛋白(GSTRNaseⅢ);设计并制备HBV基因组序列1~540核苷酸(HBV-1)的双向转录模板(T7-HBV-1);体外转录该模板获得双链RNA(dsRNA),即T7-HBV-1 dsRNA;用GST-RNaseⅢ酶切T7-H...
芹菜中核酸内切酶CELI的提取和应用概述
CELI 核酸酶 提取 单核苷酸多态性 应用
2009/6/22
CELI 是从芹菜中分离出来的一种单链特异性核酸酶, 属于S1 核酸内切酶家族中的一种, 能准确切割异源双链DNA 错配位点。
概述了CELI 酶的分离技术及其在发现单核甘酸多态性( SNP) 方面的应用, 为从事动、植物及人类遗传研究的科技工作者提供参考。
补充核酸内切酶Ⅲ对DNA 氧化损伤影响的研究
核酸内切酶Ⅲ 彗星电泳 DNA 损伤 DNA 修复
2008/10/21
目的:核酸内切酶Ⅲ在DNA 损伤的切补修复体系中可能发挥着重要作用,是否有效地促进DNA 损伤修复本文进行了探讨。方法:本研究采用“彗星”电泳技术分析DNA 断裂损伤,利用人体淋巴细胞和Hela 细胞并用100μmolH2O2 诱导DNA 严重损伤,其损伤分别达到19815 和320 (专用单位,AU) ,然后再将两种细胞各分为两组;一组为对照组,另一组为实验组补充25μl (1μg/ ml) 的...
质粒pBR322的体外扩建以及有关限制性核酸内切酶图谱
限制性核酸 体外扩建 质粒pBR322
2008/2/5
摘要在体外对质粒pBR322进行了两次扩建,并作出新建四种质粒(pBW5,pBW7,pBW5-2和pBW5-8)的有关限制性核酸内切酶图谱。经琼脂糖凝胶电泳分析和对转化体选择标记检定,证明新建质粒确为重组质粒。重组质粒都携带有大肠杆菌nrdA,B基因,有利于对这些基因的深入研究。尤其是带有pKN402K DNA片段的新建质粒pBW5-2和pBW5-8在35℃以上2—3小时内拷贝数大量增加,这就为n...
螺旋藻多糖对核酸内切酶活性和DNA修复合成的增强作用
螺旋藻 多糖 内切酶活性 DNA修复合成
2008/2/3
摘要本文用核酸内切酶实验和放射自显影术研究了螺旋藻水溶性多糖对DNA切除修复的效应。结果表明,该多糖能显著增强辐射引起DNA损伤的切除修复活性和程序外DAN合成(UDS) 。考察切除修复的时程,发现螺旋藻多糖的存在不但能加快损伤DNA切除反应和UPS的初时速度,而且能延缓以上两个重要修复反应的饱和。
限制性核酸内切酶Bsp 631特性的研究1)
限制性 核酸内切酶 Bsp 631
2008/1/18
11型限制性核酸内切酶的发现和应用,革命性地推动了分子生物学和遗传工程的发展。不管从酶本身的理论研究或从工具酶的应用研究方面来说,都必须首先确定酶促反应系统的最适条件以及各种因素对酶活性的影响,但是目前关于这类酶促反应条件的确定,多数是根据定性实验和经验,很少是根据定量实验作动力学描述。限制性核酸内切酶Bsp 631是我国自己分离的菌种和发现的新酶Ci]。已测定其识别序列,并确定它是Pst I酶的...
一种简便实用的限制性核酸内切酶定量测活方法1)
限制性 核酸内切酶 定量测活
2008/1/18
对限制性核酸内切酶进行酶学研究,无论在理论上或应用上都有着重要的意义。准确而简便的定量测活方法,是进行酶学研究的前提之一。目前这类酶的定量侧活,多采用同位素标记法或微光密度扫描法。一”,但前者受到标记底物来源、同位素半衰期和比强度的影响;后者需要昂贵的仪器,故它们的使用范围受到一定限制。下面介绍我们建立的一个简便实用的方法,即对酶切凉脂糖凝胶电泳拍照记录,其负片置测微光度计上进行测定,以此来对酶活...
II型限制性核酸内切酶在真核生物染色体显带中的应用
核酸内切酶 真核生物 染色体 显带
2008/1/16
限制性核酸内切酶(简称限制酶)能切割DNA双链。已知的限制酶有I, II和III型三类。II型限制酶能识别专一核普酸序列,并在识别序列内有固定切割点,是分子生物学研究和基因工程重要工具酶。1980年,以II型限制酶处理印度鹿染色体,沿染色体纵轴得到选择消化结果[16]。目前,限制酶这一应用研究发展成称为限制性核酸内切酶显带(Restriction endonuclease banding)的最新显...
T4核酸内切酶V的分离纯化
2007/12/20
摘要 T_4核酸内切酶V[endodeoxyribonuclease(Pyrimidine dimer)EC 3.1.25.1,简称Endo V]是由噬菌体T_4感染宿主E.coli后产生的一种修复酶。它能特异识别紫外线(UV)辐射在DNA引起的损伤产物环丁烷嘧啶二聚体(PD),在组成PD的两个嘧啶核苷酸之间切割磷酸二酯键,造成单链缺刻,从而启动E.coli体内的切除修复途径~[1]。Endo ...
摘要 本文选择限制性核酸内切酶BglⅠ和pBR322-DNA为试验系统,用酶促反应的动力学和热力学方法来研究内切酶对环状DNA分子的专一性和非专一性结合及切割过程,求得了各限制位点的切割速度k及活化能E,各限制位点催化速度常数k_c,酶同限制位点专一性结合的平衡常数k_S非专一性结合的平衡常数k_N及其热力学参数△H,△S。研究表明:不论底物的构型如何(线状还是环状),内切酶都以相似的动力学和热力...
Ⅱ型限制性核酸内切酶NcrⅠ的研究
Ⅱ型限制酶NcrⅠ BglⅡ同切限制酶
2007/12/19
摘要 在肉色诺卡氏菌C-212株Nocardia carnea C-212中筛选到一种Ⅱ型限制性核酸内切酶NcrⅠ,经与BglⅡ的λDNA降解物的酶谱比较,以及酶识别特异性和切割位点的检测,证明了NcrⅠ是已知的限制酶BglⅡ的同切限制酶,而且其切割位点也与BglⅡ相同,其为:
摘要 构建了重组质粒pSV2gpt-SV40ori-antisense-ras(简称P1),利用这一重组体进一步证实了识别序列外DNA甲基化对限制性核酸内切酶PvuⅡ切割活性的抑制作用,并对这一抑制作用进行了定量研究。结果表明:邻近PvuⅡ识别位,点的DNA甲基化可降低PvuⅡ对该位点酶切活性的70%左右。