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为确定在云南文山地区喜树上发生的疑似丛枝病的病原种类及快速检测喜树丛枝病,本研究利用植原体16S rDNA基因通用引物P1/P7和R16F2n/R16R2对感病喜树总DNA进行常规PCR和巢式PCR扩增、克隆和测序,通过系统进化分析,明确了喜树丛枝植原体属于16SrXXXII组。然后根据喜树丛枝病植原体16S rDNA基因保守区域设计并合成特异性引物和TaqMan探针,制备了喜树丛枝病植原体标准质...
旨在建立特异、敏感的实时荧光定量PCR（FQ-PCR）方法，用于非洲猪瘟病毒（ASFV）和猪瘟病毒（CSFV）野毒株的快速鉴别检测。针对ASFV的P72基因和CSFV野毒株的5'UTR非编码区序列的保守区域分别设计1对特异性引物和1条探针，经优化反应条件，建立一种基于TaqMan MGB探针技术的FQ-PCR方法，验证方法的敏感性、特异性和稳定性，对50份临床样品进行检测，并与猪瘟国标方法及OIE...
杜鹃花枯萎病菌TaqMan MGB探针实时荧光快速检测方法
杜鹃花 枯萎病菌 实时荧光PCR TaqMan-MGB探针 检测
2020/6/18
根据杜鹃花枯萎病菌（Ovulinia azaleae）及其近似种ITS基因序列差异，设计合成1对特异性引物和1条TaqMan-MGB探针，建立了杜鹃花枯萎病菌的实时荧光PCR检测方法。特异性试验结果表明，该检测方法能特异性检测杜鹃花枯萎病菌；灵敏度试验结果表明，最低检测限量为10 μL反应体系中总DNA含量0.25 pg；实际样品检测结果表明，该方法可用于疑似携带杜鹃花枯萎病菌样品的检测与初筛。此...
NS0宿主细胞残留DNA检测(定量PCR-Taqman探针法)方法的验证。方法 针对小鼠骨髓瘤细胞(NS0)基因组重复序列设计合成多对引物、探针,通过实验优选最佳的引物探针组合;应用所建立的前处理试剂盒(磁珠法)对供试品中宿主细胞残留DNA进行富集纯化;根据《国际人用药品注册技术协调会(ICH)》及《中国药典》通则9101的要求,应用所建立的NS0宿主细胞DNA残留检测试剂盒进行线性与范围、准确度...
【目的】本研究旨在建立TaqMan实时荧光定量PCR(TaqMan RT-qPCR)技术，快速检测单头烟粉虱Bemisia tabaci体内的番茄褪绿病毒(tomato chlorosis virus, ToCV)。【方法】根据 ToCV外壳蛋白保守序列设计了1对特异性引物和1条TaqMan探针，建立了TaqMan RT-qPCR方法；与常规PCR检测进行比较，检测该方法的灵敏度与特异性；并应用该...
基于TaqMan MGB探针的葡萄茎枯病菌实时荧光PCR检测方法
葡萄茎枯病菌 实时荧光PCR 检测
2020/3/13
葡萄茎枯病菌是我国进境植物检疫性有害生物。带菌植物材料是病害传播的重要载体,准确、灵敏、快速的检测方法是严格执行口岸检疫措施及研究病害防控措施的有力工具。根据葡萄茎枯病菌及其近似种的细胞骨架蛋白(Actin)基因序列差异,设计并合成1对引物和1条特异性TaqMan-MGB探针,建立了葡萄茎枯病菌的实时荧光PCR检测方法。通过对反应体系的优化,确定了葡萄茎枯病菌的实时荧光PCR最佳反应条件:引物终浓...
调查北京市部分城郊区6种鼠传病原体流行状况。方法 将已报道的TaqMan探针实时荧光定量PCR（qPCR）检测方法在本实验室进行评估，制备质粒标准品和绘制标准曲线，依据重新评估的数据确定结果的检测阈值。2017年1－6月应用夹夜法在北京市朝阳、怀柔、门头沟和平谷4个地区捕获啮齿动物，采集组织样品提取核酸，应用上述qPCR方法检测病原体。
为了灵敏而便捷的检测猪圆环病毒3型（PCV3），根据PCV3 ORF2基因组保守序列设计合成4对引物，先使用荧光染料（SYBR）定量PCR法验证其能否有效扩增目的片段，并根据结果和引物对所扩增序列的交集进一步设计TaqMan探针，通过优化反应条件和反应体系建立快速检测PCV3的实时荧光定量PCR检测方法。结果显示，SYBR染料法和TaqMan探针法均能有效地扩增PCV3标准质粒以及其他阳性样品，并...
TaqMan allelic discrimination assay for A1 and A2 alleles of the bovine CSN2 gene
allelic discrimination CSN2 alleles A1 and A2 cattle
2015/6/8
Alleles A1 and A2 of the Bos taurus CSN2 gene are the most frequent in a number of dairy cattle breeds. In this study, a new allelic discrimination assay using TaqMan fluorogenic probes was developed ...
A simplified duplex real-time PCR incorporating TaqMan minor groove binder (MGB) probes and an exogenous internal positive control for the simultaneous detection of Mycoplasma gallisepticum and Mycoplasma synoviae cultures
avian Mycoplasma spp duplex real-time PCR
2015/5/25
Mycoplasma gallisepticum (MG) and Mycoplasma synoviae (MS) are the most pathogenic and
economically important mycoplasma pathogens that infect chickens. The development of rapid and innovative
mol...
Quantification of avian influenza virus in tissues of mute swans using TaqMan real time qRT-PCR
avian influenza virus qRT-PCR TagMan probe
2015/4/1
This study reports on the first quantification of avian influenza virus in the organs of mute swans that died during the epizootic of avian influenza (H5N1) between January and April 2006 in the Czech...
胞内劳森菌TaqMan荧光定量PCR检测方法的建立
猪胞内劳森菌 TaqMan荧光定量PCR 检测
2014/12/25
为建立猪胞内劳森菌的TaqMan荧光定量PCR检测方法，针对胞内劳森菌的16S rDNA基因设计合成特异性的引物和TaqMan探针，经过优化各项反应条件，建立了TaqMan荧光定量PCR检测方法。该方法仅对胞内劳森菌靶基因有信号，其相关性方程为Ct=－3.318×log(conc)+ 38.840（R2=0.998），具有良好的线性关系，对标准质粒最低检出量为5.55 copies•μ...
TaqMan-MGB探针实时荧光定量PCR检测克罗诺杆菌MMS基因方法的建立
克罗诺杆菌(原阪崎肠杆菌) 实时荧光定量PCR TaqMan-MGB探针 局部大分子合成操作子 MMS基因 食源性致病菌 食品安全
2015/11/23
建立克罗诺杆菌的特异、灵敏的TaqMan-MGB探针实时荧光定量PCR检测方法。方法 根据GenBank公布的克罗诺杆菌MMS基因高保守序列,设计特异引物和TaqMan-MGB探针,建立和优化反应体系,用25种其他常见致病菌评价反应体系的特异性,用克罗诺杆菌MMS基因重组质粒构建实时荧光定量PCR标准曲线,对重组质粒、纯菌和人工模拟污染样本进行灵敏度试验,并与FDA推荐的TaqMan探针实时荧光P...
利用TaqMan等位基因技术鉴定烟粉虱MEAM1和MED隐种
烟粉虱 隐种 mtDNA COI SNP 等位基因选择性PCR 荧光定量
2013/9/12
MEAM1和MED是烟粉虱Bemisia tabaci两种重要的外来入侵隐种， 在我国部分地区常混合发生， 对我国农业生产造成了不同程度的危害和损失。尤其是MED隐种危害寄主范围更广， 对多种杀虫剂具有较高抗性， 防治上更为困难。因此， 如何快速鉴定烟粉虱MEAM1和MED隐种， 对于烟粉虱防治策略的选择具有十分重要的意义。本研究选择线粒体细胞色素氧化酶I(mitochondrial cytoch...