搜索结果: 1-15 共查到“生物化学 cDNA”相关记录102条 . 查询时间(0.125 秒)
利用膜蛋白酵母双杂交系统构建人尿道上皮细胞cDNA文库
膜蛋白酵母双杂交 人尿道上皮细胞 cDNA文库
2018/10/16
利用基于分离的泛素介导的膜蛋白酵母双杂交技术,构建人永生尿道上皮细胞(SV-HUC-1)cDNA文库。Trizol法提取人尿道上皮细胞总RNA,并分离纯化其mRNA;以mRNA为模板,合成cDNA第一链、第二链;通过T4 DNA聚合酶将DNA链两端加上5′接头;并将其大于1 kbp的片段与膜蛋白酵母双杂交载体pPR3-N连接,经电转化大肠杆菌感受态细胞,以构建基于分离的泛素介导的膜蛋白酵母双杂交c...
中华鲟铁蛋白基因cDNA全长克隆与组织表达分析(英文)
中华鲟 铁蛋白 生物信息学
2009/6/19
根据铁蛋白基因的保守序列,搜索GenBank数据库中华鲟的EST数据库得到一条同源序列。通过RT-PCR的方法对该序列进行扩增,修改其测序错误,获得中华鲟铁蛋白亚基cDNA全长,经过注释提交GenBank数据库,获取序列登录号EU348782。该cDNA长度为896 bp,包含531bp的完整编码区,推测编码的蛋白质为176 aa,分子量为20339.9 Mr,理论等电点为5.66。它和大西洋鲑鱼...
人体胸腺喀咤核普激酶不完全cDNA的分离、结构分析和表达
喀咤核普激酶 人体胸腺
2008/2/5
摘要本文报道了从人休成纤维细胞mRNA制成的cDNA文库中分离出细胞质胸腺嚓陡核普激酶(TK-C; EC2.7.1.21)的cDNAO测定了它的大小约为1.37kb,确定了它的酶切图谱。这是缺失了将近160个核营酸对的非全长的人体TK-C cDNA。它单独不能表达TK活性.可是当它同另一个单独也不产生TK活性的、从人体TK-C基因中分离出来的长为,4kb的DNA片段一起转化小鼠TK缺陷型细胞Ltk...
人工合成草鱼生长激素cDNA在大肠杆菌中的表达
草鱼生长激素 原核表达 纯化 酶联免疫吸附受体检测
2008/2/4
摘要经密码子优化的人工合成草鱼生长激素cDNA与表达载体pET-28a(+)重组,构建重组表达质粒pET-GH。转化大肠杆菌BL21(DE3),筛选阳性克隆,IPTG诱导表达。12.5%的SDS-PAGE分析显示,大肠杆菌表达产物中含有与草鱼生长激素分子量一致的新增蛋白带,激光密度扫描,其产量约占菌体总蛋白的40%。金属离子螯合层析柱亲和纯化,获得电泳纯的重组蛋白。Western-blotting...
芜菁花叶病毒(TuMV)核酸cDNA的合成与克隆
芜菁花叶病毒(TuMV) cDNA 分子克隆 菌落原位杂交
2008/2/2
摘要从接种芜菁花叶病毒后发病芥菜(Brassica iuneaen)中提取病毒,然后提取其核酸(TuMV-RN A)。以纯化的TuMV-RNA为模板,以Oligo(dT)12-18及小牛胸腺DNA水解物为引物,合成双链c DNA,双链cDNA长度约500—4300bp。将双链cDNA补齐后,钝端连接到pUC19质粒的Smal位点 ,转化E.coli DH5a获得500多个白色克隆。菌落原位杂交及酶...
中国对虾蜕皮抑制激素全长cDNA的克隆及序列分析
中国对虾 蜕皮抑制激素 cDNA 克隆 序列分析
2008/1/29
摘要对虾的蜕皮活动由蜕皮抑制激素和蜕皮激素调控,蜕皮抑制激素是甲壳动物CHH家族神经肽的成员之一,通过抑制Y器官蜕皮激素的合成而调节蜕皮。以中国对虾(Fennropenaeus chinensis)眼柄总RNA为材料,采用cDNA末端快速扩增(RACE)方法,首次得到蜕皮抑制激素的全长cDNA (GenBank 登录号为AF469187)。该全长cDNA大小为697bp,是由320bp的 3ˊRA...
通过显微注射技术,将冠以鲤鱼β-肌动蛋白基因(CA)启动调控顺序的鲑鱼胰岛素样生长因子I(sIGF-I)的cDNA,即CAsIGFc,注入镜鲤(Cyprinus capiovar.specularis)受精卵内。经聚合酶链式反应(PCR)技术检测,受体胚胎发育各期均携带有外源基因拷贝。在由此发育的5月龄鱼中,80%的个体带有外源基因拷贝。用逆转录-聚合酶链式反应(RT-PCR)技术检测,发现2/3...
6种重要经济鱼类生长激素完整cDNA的克隆和序列分析
生长激素 完整cDNA 序列分析
2008/1/20
摘要通过RT-PCR、3′-RACE、5′-RACE方法,从6种重要经济鱼类——大眼鳜(Siniperca kneri)、石斑鱼(Epinephelus coioides)、黄鳝(Monopterus albus)、鲶鱼(Silurus asotus)、泥鳅(Misgurnus anguillicaudatus)和方正银鲫(Carassius auratus gibelio Bloch, Fang...
应用聚合酶链反应改造蛙鱼生长激素cDNA
聚合酶链反应 蛙鱼 生长激素 cDNA
2008/1/15
为了在大肠杆菌中表达天然序列的娃鱼生长激素基因,本研究应用聚合酶链反应扩增方法改造娃鱼生长激素cDNA,成功地扩增出编码蛙鱼生长激素成熟肤的序列,并在该序列的5端和3端分别引人EcoRI和BamHI的识别序列,使之便于进入载体,获得亚克隆。结果表明:应用聚合酶链反应扩增及分子克隆方法改造蛙鱼生长激素cDNA较传统的DNA重组方法简便,效率高。文中对聚合酶链反应扩增中非预期突变进行了讨论。
摘要 利用cDNA末端快速扩增 (RACE)技术克隆了一条由左侧视网膜剥夺造成左前脑差异表达EST片段的全长cDNA序列 ,同源性比较后认定 ,其为鸽e(r)基因 .该基因与人类及斑马鱼等脊椎动物e(r)基因的同源性非常高 ,但C端有明显差异 .RNA斑点杂交、逆转录聚合酶链反应 (RT PCR)及Northern印迹等方法检测 ,该基因在不同组织中表达量有差异 .结果表明 ,鸽e(r)基因在左眼...
猪生长激素cDNA在芽孢杆菌中的表达
猪生长激素 基因表达 枯草杆菌 短小茅孢杆菌
2008/1/5
摘要 利用随机克隆的枯草杆菌启动子-信号序列构建茅孢杆菌分泌载体pUS186。用限制酶将切除了信号序列的猪生长激素cDNA从质粒pLY3-PGH 604切下,亚克隆至pUS186,并在该cDNA的下游接上地衣杆菌α-淀粉酶基因的转录终止子,构建猪生长激素表达质粒pSGH 1864,将此质粒转化蛋白酶双缺陷的枯草杆菌DB104及短小茅孢杆菌289。SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳检出在发酵上清液中多出一条...
猪生长激素cDNA的分子克隆
猪 生长激素 cDNA 分子克隆
2008/1/5
摘要 用改进的氯化锂沉淀沉法和寡聚(dT)一纤维素亲和层析法由猪垂体制得总mRNA。以此总mRNA为模板,合成cDNA。钝端连接重组到质粒pUC19的SmaI位点,转化E.coli JM107,筛选出阳性克隆。用限制性内切酶酶切签定及5’端部分核苷酸序列分析证明:克隆了全长猪生长激素cDNA,其长度约为896bp。
应用cDNA文库快速构建法克隆高粱肌动蛋白基因
高粱 肌动蛋白基因 cDNA文库快速构建
2008/1/5
摘要 取生长一周的高粱嫩叶为材料,按照cDNA文库快速构建法,用λgt10为载体成功地获得了含有2×106个重组噬菌体的cDNA文库。以水稻RAclcDNA为探针,经噬菌体原位杂交筛选出两个阳性克隆片段,并对其中一个进行了Southern杂交鉴定.然后将重组体中含有的cDNA片段(SoAcl)亚克隆至pBluescriptSK-载体上测序.结果表明高粱肌动蛋白基因SoAcl的序列长度为1445个核...
摘要 用改进的LiCl沉淀法和寡聚(dT)-纤维素亲和层析法由猪垂体制得总mRNA。在兔网织红细胞无细胞翻译体系中进行体外翻译的结果表明,制得的总mRNA具有一定的翻译活力。翻译产物与兔抗猪生长激素抗血清发生免疫沉淀,沉淀物占总翻译产物的10%左右。SDS聚丙烯酰胺凝胶电泳的结果表明翻译产物有一条很深的带,分子量约为24,000道尔顿,与猪前生长激素的分子量相近。以制备的mRNA为模板反转录合成了...