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鉴定痢疾杆菌毒力基因的SW480细胞模型构建Construction of SW480 Cell Model Identifying Shigella Virulent Genes
SW480 细胞模型 痢疾杆菌 信号标签诱变技术 构建
2008/1/8
摘要
信号标签诱变技术（STM）是一种在体内高通量筛选病原体毒力基因的新方法，在应用时的一个先决条件是要建立合适的体内筛选系统。为将该技术应用于福氏痢疾杆菌，我们使用三个福氏痢疾杆菌菌株进行了预试验：通过同源重组构建而成的带有氯霉素抗性且aroA和virG基因失活的突变株RC426；因在侵袭质粒上自发缺失3个基因座(ipaBCDA, invA 和 virG)的另一减毒突变株T32，其曾被用作福氏...
一种简便、快速的大肠杆菌质粒转化方法
转化 大肠杆菌 Ca2+选择平板
2008/1/7
将受体菌与质粒DNA混匀直接在Ca2+离子选择平板上进行转化和筛选，其转化过程仅需2 min左右，并能得到105以上的转化效率, 可满足一般克隆工作的需要。
以耐辐射异常球菌为试材，以E. coli 为对照，用显微扫描电镜和3H-TdR标记，研究了离子注入对微生物细胞的刻蚀与对DNA的损伤及其修复。结果表明，注入离子对细胞存在着刻蚀损伤；中性蔗糖梯度密度离心沉降分析证明, 大剂量下离子注入可直接导致DNA损伤，并观察到在对应的存活率峰值注入剂量下，D. radiodurans修复损伤DNA的能力比E. coli 强，还证明了细胞经不同时间温育后，损伤的...
苏云金芽胞杆菌因为产生伴胞晶体而在表型上区别于其他近缘种,而伴胞晶体具有杀虫活性而受到人们的普遍关注和重视。本文通过杀虫晶体蛋白及其基因型，以及携带杀虫晶体蛋白基因的质粒类型在苏云金芽胞杆菌中的不同分布阐述了杀虫晶体蛋白及其基因的多态性。
真菌寡糖诱导植物抗性活性成分的分离纯化
2008/1/5
Oligosaccharides derived from cell wall of fungal DL603 were isolated and purified. The hydrolysis of the fungal DL603 with enzyme G603 was conducted, and ion exchange and gel filtration chromatograph...
野生型发根农杆菌K599的解毒
发根农杆菌K599 解毒
2008/1/4
本研究利用DNA重组技术构建了来源于质粒pJBJ106、pBluescriptSK(+)和pUCD800的新质粒pXT3sacB,利用该质粒通过同源重组切除了野生型发根农杆菌K599中Ri质粒的T-DNA.解毒后的K599获得了氨苄/羧苄青霉素抗性和10%蔗糖抑制生长的选择标记.解毒后的K599菌株可能对农杆菌转基因技术是有益的。
噬菌体抗体库技术：靠近理想的现实
噬菌体抗体库技术 构建 种类 筛选方法
2008/1/4
噬菌体抗体库技术是近年来在基因工程抗体研究领域中发展起来的一项新技术，该技术把特异性结合和高效筛选有机结合，大大缩减了获得目的性抗体的工作量。本文综述了噬菌体抗体库的构建，种类，筛选方法及最新进展。
可直接克隆PCR产物的克隆载体的构建
PCR产物 克隆载体 pUC118 大肠杆菌JM109
2008/1/3
本文描述一种构建与PCR产物直接连接的克隆载体的方法。以高拷贝克隆载体pUC118为骨架载体，在pUC118质粒氨苄抗性基因的Eam1105 I 酶切位点上，以点突变的方式封闭Eam1105 I 酶切位点。经转化大肠杆菌JM109证实，该改造过的pUC118质粒，可使宿主细胞仍具有氨苄抗性。将一人工合成的具有两个Eam1105 I 酶切位点的互补寡聚核苷酸链（两端具有BamH I 接头）插入已封闭...
微生物全基因组鸟枪法测序
微生物 全基因组 鸟枪法测序
2008/1/3
全基因组测序主要有二种策略，一种是分级鸟枪法测序，另一种是全基因组鸟枪法测序。微生物是一种十分重要的遗传资源，运用全基因组鸟枪法可以方便、快捷地完成其基因组的测序任务。本文对微生物全基因组鸟枪法测序中文库构建、插入片段的长短比例、反应投入量、拼接以及补洞等问题作了较细致的描述，有些步骤作了举例说明。
一种新的丙型肝炎病毒单链丝氨酸蛋白酶基因的构建、表达与鉴定
丙型肝炎病毒 丝氨酸蛋白酶 基因表达
2008/1/3
摘要 根据丙型肝炎病毒 (HCV)丝氨酸蛋白酶晶体结构特点 ,设计并构建了一种新的单链型丝氨酸蛋白酶分子 .该分子由辅因子NS4A的核心序列、柔性连接子GSGS和NS3丝氨酸蛋白酶结构域组成 .利用设计的 3条引物 ,通过 2轮PCR获得单链丝氨酸蛋白酶基因 ,插入原核表达载体pQE30中 ,转化大肠杆菌M15 ,获得重组克隆 .经低剂量诱导和低温培养 ,目的基因获得高水平可溶表达 .以金属螯合层...
一种纯化细菌有机磷水解酶的简便方法
纯化 有机磷水解酶 亲和层析
2008/1/3
摘要 Cibacron blue T_3GA与溴化氰活化的Sepharose 4B偶联后,产生一种能有效地分离有机磷水解酶的吸附剂。用0.15mol/L MgCl_2溶液从黄杆菌P3—2细胞抽提出的粗酶液通过柱层析分离,即可得到纯化8倍、酶活性回收率为269.4％的纯酶制品。该酶制品用凝胶电泳测是均一的。
禾草内生真菌生物碱的研究进展
内生真菌 禾草 生物碱
2008/1/2
摘要 综述了国内外近20a以来在禾草内生真菌生物碱方面的研究进展。目前，已发现至少4大类10余种生物碱与内生真菌有关。各类生物碱中典型代表物的分子结构已完全清楚，部分内生真菌在离体条件下可产生除黑麦草碱外的生物碱，但产碱量较其在植物体中所产生的低很多，可相差150余倍之多。随着生物技术的发展，美国、新西兰等国在波胺、麦角碱和loline的生物合成途径方面已有了初步的进展，对个别具有重要功能基因以及...
同源重组菌株M53的构建及其作为链霉菌通用克隆受体的可行性
葡萄糖异构酶 链霉菌 同源重组 克隆受体
2008/1/1
摘要 为了发展优良的链霉菌宿主系统 ,以带有硫链丝菌素抗性的同源重组葡萄糖异构酶 (GI)缺陷型菌株M10 33XW78,M10 33XW194为出发菌株 ,利用摇瓶、影印和负筛的方法 ,获得一株既无GI活性又对硫链丝菌素敏感的回复菌株 ,命名为淀粉酶链霉菌M5 3.通过染色体PCR检测、酶切图谱鉴定、序列分析等方法 ,确认M5 3含有和M10 33一致的 1 2kb葡萄糖异构酶基因 ,但在结构...
大肠杆菌FC40系统静止期突变中的F因子转移The Occurrence of Actual F Factor Transfer during the Stationary-phase Mutation in Escherichia coli FC40
大肠杆菌FC40系统 适应性突变 F因子转移
2007/12/31
摘要本研究采用大肠杆菌GM133 rifr细胞和营养收集细胞HB214 strr进行适应性突变实验。在混合30min和2d 后添加链霉素杀死GM133基因型细胞，继续培养5d后，在选择平板上出现了一定数量的lac+strr基因型回复突变菌落。根据这些突变菌落的数量，估计在lac+突变产生之前，GM133和HB214细胞之间的接合频率分别为0.07%和7.47%。在培养了7d的选择平板上添加含链霉素...
ERIC-PCR技术在李斯特氏菌种、菌株鉴定中的应用ERIC-PCR on Identification of Listeria Species and Strain
肠杆菌基因间重复一致序列 PCR 李斯特氏菌 DNA指纹图谱
2007/12/30
摘要应用肠杆菌基因间重复一致序列聚合酶链反应技术（ERIC-PCR）对李斯特氏菌基因组DNA进行分析，结果显示，李斯特氏菌种间DNA指纹图谱带型差异较大；单核细胞增生性李斯特氏菌株间及相同血清型不同来源的菌株，其DNA指纹图谱带型也有明显差异。在单核细胞增生性李斯特氏菌各株的DNA指纹图谱中发现1600bp的种专一性扩增带。结果表明，ERIC-PCR技术可用于李斯特氏菌种、菌株的鉴定及进一步分型研...