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Satb2基因慢病毒载体的构建及其鉴定
慢病毒 特殊富含AT序列结合蛋白2 牙周炎 牙周组织再生 293T细胞
2021/1/6
构建特殊富含AT序列结合蛋白2 (Satb2)基因慢病毒表达载体并通过感染293T细胞检测目的基因的表达。方法 采用PCR技术扩增目的基因Satb2，并在目的基因的上下游分别添加酶切位点PacⅠ和AscⅠ，将其PCR产物和目的载体用PacⅠ和AscⅠ分别进行双酶切，通过T4 DNA ligase连接酶切后的PCR产物及目的载体，构建pLenti6.3-Satb2-IRES-EGFP慢病毒表达载体，...
探讨抑制FLOT1基因表达对胃癌细胞侵袭、凋亡的影响及机制。方法 将设计合成的FLOT1 siRNA慢病毒载体(si-FLOT1组)转染人胃癌MKN-45细胞,同时转染阴性对照慢病毒载体(阴性组),并设置空白组。Western blotting检测转染48 h后细胞FLOT1、E-cadherin、α-SMA、cleaved caspase 3、Bcl-2和Bax蛋白表达。CCK-8法检测转染24...
慢病毒介导的DKK3过表达对增生性瘢痕成纤维细胞凋亡的影响
DKK3基因 增生性瘢痕成纤维细胞 细胞凋亡 胶原蛋白 细胞色素C
2020/9/17
探讨慢病毒介导的DKK3过表达对增生性瘢痕成纤维细胞凋亡的影响。方法：体外分离培养人增生性瘢痕成纤维细胞，将细胞分成对照（control）组、阴性对照慢病毒感染（vector）组和pcDNA3.1-DKK3慢病毒感染（DKK3）组，RT-qPCR和Western blot检测过表达效果，MTT检测细胞活力，流式细胞术检测细胞凋亡，Western blot检测细胞中激活型caspase-9（clea...
小窝蛋白-1重组慢病毒载体的构建及鉴定
小窝蛋白-1 重组慢病毒载体 急性肺损伤
2020/12/15
构建小窝蛋白-1（Cav-1）重组慢病毒载体，并在293T细胞和小鼠中验证Cav-1过表达。方法将Cav-1基因克隆至慢病毒载体GV287，然后利用酶切、PCR扩增鉴定、阳性克隆鉴定及测序验证构建Cav-1重组慢病毒。将Cav-1重组慢病毒转染至293T细胞，通过荧光检测慢病毒转染效果，采用Westernblot法检测Cav-1蛋白表达情况，同时转染C57BL6小鼠，免疫组化法检测小鼠肺组织中Ca...
前列腺癌多发生于老年男性，其发病率和死亡率正在逐年上升。对于早期前列腺癌，采用阻断雄激素的去势治疗可以有效抑制肿瘤生长，但在治疗2～3年后大部分进展为去势抵抗性前列腺癌，这是导致患者死亡的主要原因。目前，对晚期尤其是去势抵抗性前列腺癌尚缺乏有效的治疗策略，随着生物技术的兴起与发展，针对恶性肿瘤的生物靶向治疗研究日趋深入和成熟，其中慢病毒介导的基因治疗成为研究的热点。运用特异性启动子调控相关基因的表...
日前，中国水产科学研究院长江水产研究所马杰、曾令兵等发明的“一种慢病毒转染鱼类或两栖类细胞系的方法”获国家发明专利授权，专利号为ZL201510459345.8。该发明公开了一种慢病毒转染鱼类或两栖类细胞系的方法。相关技术方案为：在慢病毒感染目的细胞中使用Lipofectamine 2000，目的细胞系被感染后，培养温度呈梯度变化，具体为30-32℃ 2h、26-8℃ 2h、20-25℃持续培养。...
慢病毒介导的Med19表达下调提高舌鳞癌细胞顺铂敏感性
Med19 舌鳞癌 顺铂 凋亡
2020/6/2
探讨慢病毒介导的中介体19(Med19)表达下调对舌鳞癌细胞顺铂敏感性的影响。方法:qRT-PCR和Western blot检测舌鳞癌细胞和正常口腔上皮细胞中Med19表达变化。在舌鳞癌细胞中转染Med19 shRNA,以顺铂处理下调Med19的舌鳞癌细胞,MTT和流式细胞术测定增殖和凋亡,Western blot检测活化型Caspase-3(C-Caspase-3)、活化型Caspase-9(C...
观察白介素-1β（IL-1β）小干扰RNA（siRNA）对脊髓钝挫伤（spinal cord contusion，SCC）大鼠运动功能的影响，并探讨其相关机制。方法：98只雌性SD大鼠随机分为4组：假手术组（Sham组）、单纯SCC组（SCC组）、空载体组（Vector组）和慢病毒干扰组（IL-1β SH组）。IL-1β SH组和空载体组术前48h在拟损伤脊髓节段局部注射IL-1β siRNA或空...
构建携带线粒体融合蛋白2（Mfn2）基因的慢病毒载体，并探讨Mfn2过表达对大鼠肝星状细胞活化的抑制作用及其减少肝纤维化相关因子生成的机制。方法：构建含Mfn2的慢病毒过表达载体CV072-pCMV-Mfn2-EGFP，转染肝星状细胞；荧光显微镜下观察细胞中绿色荧光蛋白的表达及转染效率；RT-qPCR和Western blot法检测转染后细胞中Mfn2的mRNA和蛋白表达水平；Western bl...
探讨慢病毒介导的Notch1基因沉默对软骨肉瘤SW1353细胞增殖和侵袭的抑制作用及其机制。方法：将SW1353细胞分为对照组（未感染）、空载体组（LV-NC-shRNA慢病毒感染）和沉默组（LV-Notch1-shRNA慢病毒感染），RT-PCR和Western blot检测慢病毒的感染效果，MTT法和克隆形成实验检测各组细胞的增殖活力，Transwell小室实验检测细胞的侵袭能力，Wester...
探讨含卷曲螺旋结构域蛋白80（coiled-coil domain-conaining protein 80，CCDC80）基因敲除对人卵巢癌ES-2细胞增殖和凋亡的影响。方法：慢病毒介导的CRISPR/Cas9技术敲除卵巢癌ES-2细胞中的CCDC80基因，基因组测序检测CCDC80的敲除效率；细胞增殖曲线、细胞划痕实验和软琼脂克隆形成实验检测CCDC80基因敲除对细胞增殖、迁移和克隆形成能力影...
探讨基于CRISPR/cas9(Clustered regularly interspaced short palindromic repeat sequences/CRISPR-associated protein 9)文库筛选的慢病毒库包装优化条件。采用RT-PCR、酶联免疫吸附试验(ELISA法)和免疫荧光法，对不同质粒配比、不同收毒时间以及不同量的Lipofectamine 3000 re...
探讨含人干细胞白血病(stem cell leukemia，SCL)基因重组慢病毒对高糖环境下受损Cajal间质细胞(interstitial cells of Cajal，ICC)中酪氨酸激酶受体(c-kit)蛋白表达的影响。方法：分离ICC，培养24 h贴壁，经倒置显微镜、免疫荧光鉴定后，将ICC细胞分为对照组、高糖组，对照组加入含5 mmol/L葡萄糖的培养基，高糖组加入含20 mmol/L...
慢病毒介导siRNA干扰CEP55表达对卵巢癌细胞生物学行为的影响
慢病毒 中心体相关蛋白55 卵巢癌 生物学行为
2018/9/21
本文通过慢病毒介导siRNA干扰卵巢癌SKOV3细胞中心体相关蛋白55(CEP55)表达,以观察其对细胞增殖、凋亡、侵袭和迁移等生物学行为的影响。实验分为CEP55组(转染CEP55 siRNA慢病毒)、阴性对照组(转染不含CEP55 siRNA的慢病毒)和空白对照组(不处理)。结果显示:CEP55 siRNA慢病毒转染效率为(89.4±4.7)%,CEP55组CEP55的mRNA和蛋白表达显著降...