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亚洲猫β-干扰素基因的克隆与分析
β- 干扰素 亚洲猫 克隆 分析
2009/6/2
[ 目的] 为猫干扰素类生物制品的研究奠定基础。[ 方法] 根据NCBI 上的猫I FN-β基因序列, 设计1 对特异引物。以从病死猫肝脏
组织中提取的基因组DNA 为模板, 进行PCR 扩增。将扩增产物回收后, 与pUCm-T 载体连接, 并转化到大肠杆菌DH5α感受态细胞。通
过PCR 和双酶切对获得的质粒DNA 进行鉴定后, 进行序列分析和核苷酸、氨基酸序列同源性的比较。[ 结果] 经P...
该研究从猪肝脏中提取了基因组DNA，利用PCR法扩增和克隆猪干扰素（IFN）β基因，并且能够在大肠杆菌中高效表达。重组猪β干扰素（IFN）是一种高活性多功能的诱生蛋白，它通过抑制病毒DNA、RNA和细菌DNA、RNA的合成复制，达到防病治病的效果。由于猪的疾病每年给我国造成巨大的经济损失，而且由于常规用药经常造成药物残留，不仅影响出口，而且还危害广大人民的生命健康，而猪β干扰素治疗猪的疾病，效果好...
为了高效表达分泌型的猪β-干扰素，将去除信号肽的编码梅山猪β-干扰素成熟多肽基因（mPoIFNβ）插入酵母－大肠杆菌穿梭载体pPIC 9K，构建成分泌型重组表达载体pPIC 9K-mPoIFNβ。将以SalⅠ线性化的pPIC 9K-mPoIFNβ用化学方法(LiCl)，与鲑鱼精DNA (ssDNA)共转化入毕赤酵母菌株GS115，转化子经MD平板筛选和PCR鉴定后获得阳性菌株，再经高浓度G418筛...