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【发明专利】用于检测I型和II型非洲猪瘟病毒的多重荧光PCR引物探针组、方法和应用。
该成果研发了一种鸭新城疫、鸭瘟和鸭坦布苏病毒病的多重PCR检测引物，包括针对鸭新城疫病毒、鸭瘟病毒和鸭坦布苏病毒的引物。建立了多重PCR体系，可准确检测水禽NDV、DPV、DTMUV的单一或混合感染，并对该多重PCR体系进行了优化，确定了最佳的引物比例、引物浓度和Premix rTaq酶，使得NDV、DPV、DTMUV3种病毒的DNA扩增效果更好，检测精度更高，在鉴别时具有重要优势。
旨在分析禽腺病毒血清4型（FAdV-4）感染鸡组织中NLRP3基因的转录水平，本研究设计鸡NLRP3特异性引物，利用RT-PCR扩增NLRP3基因180 bp片段并克隆至pMD-18T载体，制备重组质粒pMD-18T-NLRP3。以pMD-18T-NLRP3质粒作为标准品进行荧光定量PCR并建立标准曲线。通过反应条件优化，成功建立了检测NLRP3基因的实时荧光定量PCR方法，并利用该方法对致病性F...
1种检测新城疫病毒的微滴式数字PCR方法
新城疫病毒 数字PCR 检测方法
2021/3/9
本研究旨在构建一种新城疫病毒（Newcastle disease virus，NDV）的微滴式数字PCR方法（droplet digital PCR，ddPCR）。以NDV F基因为靶基因，选取保守区域设计引物和探针，构建了NDV ddPCR。对ddPCR反应引物和探针浓度、退火温度进行了优化，并对该方法的灵敏度、特异性和重复性进行测定。试验结果表明，ddPCR的最佳引物和探针浓度分别为900和2...
2020年5月13日，福建省农业科学院畜牧兽医研究所牵头制定的福建省地方标准《鸭巴泰病毒RT-PCR检测方法》审定会在福州召开。会议由福建省市场监督管理局组织，邀请福建省畜牧兽医学会、福建省标准化研究院、福建省畜牧总站、福建师范大学、福州市动物疫病预防控制中心、福建农业职业技术学院和兆丰华生物科技（福州）有限公司7个单位的专家对该标准进行审定。
常见耐药基因多重PCR方法的建立及用于禽致病性大肠杆菌耐药性监测
耐药基因 多重PCR 检测
2021/3/9
本研究旨在建立β-内酰胺类、四环素类、氨基苷类、酰胺醇类、磺胺类抗菌药物耐药基因的多重PCR检测方法，用于耐药基因的快速检测。根据GenBank公布的上述5类抗菌药物的耐药基因序列，设计17对特异性引物。通过优化PCR体系和反应程序，建立4组耐药基因（cat+floR+tetB+tetC；dfrA12+sul2+sul1+blaCTX-M+balTEM-1；aac3+aph3+aadA1+strB...
旨在建立特异、敏感的实时荧光定量PCR（FQ-PCR）方法，用于非洲猪瘟病毒（ASFV）和猪瘟病毒（CSFV）野毒株的快速鉴别检测。针对ASFV的P72基因和CSFV野毒株的5'UTR非编码区序列的保守区域分别设计1对特异性引物和1条探针，经优化反应条件，建立一种基于TaqMan MGB探针技术的FQ-PCR方法，验证方法的敏感性、特异性和稳定性，对50份临床样品进行检测，并与猪瘟国标方法及OIE...
区分犬瘟热病毒Asia-Ⅰ型野毒株及疫苗株的AS-PCR方法
犬瘟热病毒 检测 H基因 AS-PCR
2021/3/11
犬瘟热是一种接触性传染病，可侵害免疫系统、呼吸系统、消化系统，甚至神经系统，导致全身性的病理变化，对宠物犬、毛皮动物等存在巨大威胁。目前常用的胶体金检测法不能有效区分疫苗免疫与动物自然感染。为建立一种高效准确的鉴别犬瘟热病毒野毒株和疫苗株的检测方法，本试验对从武汉地区收集已确诊犬瘟热的6只犬分离得到的野毒株以及3株广泛使用的CDV疫苗株进行全基因组测序，从氨基酸水平和碱基水平比对分析后，确定H基因...
7种食源性致病菌GeXP多重PCR检测方法的建立及其应用
食源性致病菌 GeXP 多重PCR 特异性嵌合引物
2021/3/11
本研究旨在建立一种能够同时鉴别包括大肠杆菌O157：H7、沙门菌、空肠弯曲菌、单核细胞增生李斯特菌、霍乱弧菌、副溶血弧菌和金黄色葡萄球菌7种常见食源性致病菌的GeXP多重PCR检测方法。根据这些致病菌在GenBank上公布的保守基因序列，设计合成了7对特异性GeXP引物。用单一或混合细菌样品的DNA模板优化反应条件，设置对照组，构建重组质粒，随机组合不同浓度的样品，验证所建立的GeXP方法的特异性...
本试验的目的是建立更加灵敏的检测牛冠状病毒（BCoV）的RT-PCR方法，并对川西北草原牦牛病料进行BCoV病原检测。选择BCoV聚合酶基因Nsp7-Nsp9片段设计引物，通过反应条件和体系优化，建立检测BCoV的RT-PCR方法并应用于临床样本检测。结果显示：所建方法特异性和重复性好，灵敏性达到1×10-2 pg·μL-1；该方法对肉牛和牦牛BCoV都有良好的检测效果，优于比较的两种以BCoV ...
鸭肠炎病毒（duck enteritis virus，DEV）疫苗株自1960年以来一直被用于防控DEV感染，该疫苗安全稳定、生产技术成熟、可快速诱导机体体液免疫和细胞免疫。DEV的基因组庞大，复制非必需区多，可容纳多个外源基因的插入，被广泛用来作为基因工程载体来开发疫苗。当前，尚未见仅针对DEV疫苗株的实时荧光定量PCR检测方法相关研究报道。本研究通过分析DEV疫苗株和强毒株UL2基因特点，明确...
应用多重实时荧光PCR方法对8种动物毛纤维种类鉴别的研究
动物毛纤维 多重实时荧光PCR 鉴定
2019/1/15
本研究旨在利用多重实时荧光PCR方法对水貂、狐狸、骆驼、兔、山羊、绵羊、鸭和鹅8种动物毛纤维进行物种鉴定研究。利用碱裂解法加入二硫苏糖醇，并结合硅珠吸附核酸法来优化动物毛纤维DNA的提取；根据8种动物16S rDNA基因特异核苷酸序列设计通用PCR引物和特异性TaqMan荧光探针；通过优化引物和探针浓度及退火温度等PCR反应体系和条件，建立了多重实时荧光PCR检测体系；并对多重PCR体系的特异性、...
伪狂犬病病毒微滴数字PCR定量检测方法的建立
伪狂犬病病毒 微滴数字PCR 检测方法
2018/4/2
为了建立伪狂犬病病毒（PRV）微滴数字PCR（droplet digital PCR，ddPCR）的检测方法，以伪狂犬病病毒gB基因为靶基因，建立了可对其准确定量的微滴数字PCR方法。对ddPCR反应中的引物浓度、探针浓度、退火温度进行了优化。对建立的ddPCR方法的特异性和敏感性也进行测定，并且应用于临床样品的检测。结果表明，ddPCR的最佳引物浓度为0.9 μmol·L-1，探针浓度为0.25...
猪丁型冠状病毒（PDCoV）与猪流行性腹泻病毒（PEDV）均为致病性冠状病毒，可以引起猪呕吐、腹泻脱水和新生仔猪死亡。为了建立一种快速检测PDCoV和PEDV的双重SYBR Green I荧光定量RT-PCR方法，根据GenBank登录的2种病毒基因的保守序列，设计了两对特异性引物，分别扩增其N、M基因保守区，并将其克隆至pMD19-T载体；将10倍梯度稀释的混合重组质粒作为标准品模板，建立了一种...